服务简介
背景: 相较传统抗体，驼源抗体具有较高的亲和力，易于重组表达制备，易人源化，易与其它靶点抗体组合，在疾病诊断和治疗领域有着很大的应用价值和发展前景。三优隆重推出磁阵列羊驼重组单抗定制服务。
服务亮点
抗体数量丰富，可获上百分子
运用阵列化抗体库构建技术和高通量自动化批量筛选工艺，单一靶点可获得数十至上百个候选分子。
减少冗余筛选，提升交付率
本服务采用基因工程和噬菌体展示技术，可直接获得抗体的基因序列，以减少不必要的筛选工作。
挑战高难靶点，覆盖全表位
针对G蛋白偶联受体、离子通道、多次跨膜蛋白等高难度靶点可获得大量抗体分子，覆盖蛋白大部分表位。
真核细胞表达，保证成药性
将先导抗体构建全长，通过CHO/293真核表达系统进行表达，对抗体的理化性质以及细胞功能做全面的检测。
服务内容
服务特性
1. 先导抗体数量通常可达数十个
通过三优MIT羊驼单克隆抗体定制服务筛选获得的纳米抗体先导分子数量较多。如图Fig.1 所示，通过10个靶点对MIT羊驼库进行验证，共获得475个具有独特序列的抗体克隆，克隆数中值为38个。
Fig. 1 Binding affinity determination by FACS
2. 先导抗体亲和力高
通过三优MIT羊驼单克隆抗体定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子亲和力高，可达pM水平。对所得单域抗体克隆构建全长IgG后的亲和力测定情况如下所示。Fig. 2和Fig. 3中的抗体来自两个不同的项目，由图可知，这两个项目均可获得多个亲和力与对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子。
Fig. 2 Affinity ranking assay of SD10
Fig. 3 Affinity ranking assay of SD41
3. 全面成药性分析
MIT羊驼单克隆抗体定制服务获得的分子构建全长后，对抗体的表达量，以及抗体的理化特性进行分析。如Table 1所示，展示了全面的成药性评价体系，包括纯度及浓度测定，一级结构分析和亲和力及亲和动力学等多个维度。
Table 1 Drug developability of antibody from MITA
技术流程
案例展示
案例一：抗PD-L1纳米抗体的开发
1. 背景
PD-L1（Programmed cell death 1 ligand），具有免疫球蛋白结构的I型单次跨膜糖蛋白。PD-L1与PD-1结合后传递抑制信号，减少淋巴结中抗原特异性T细胞的增殖。PD-L1在多种肿瘤细胞表面高表达，比如：恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、膀胱癌、胃癌。
1.1 临床竞争格局
全球以PD-L1为靶点的抗体药物已有多款上市，国外的比如基因泰克的阿替利珠单抗，默克的阿维单抗，国内的比如说基石药业的舒格利单抗，康宁杰瑞的恩沃利单抗。单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1的结合已成为一种新的肿瘤免疫治疗手段，在恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、膀胱癌、胃癌等多种类型肿瘤患者的治疗过程中均表现出显著疗效。
1.2 单克隆抗体MOA
靶向PD-L1的抗体能够抑制PD-L1与PD-1的结合，激活T细胞对肿瘤的杀伤效应。
2. 抗PD-L1抗体关键结果
2.1 细胞水平结合活性
通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子大多具有细胞水平活性和阻断活性。图Fig. 1 展示了采用FACS分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的一个案例项目。由图可知，全部先导抗体分子均展现了良好的细胞水平的结合活性。
Fig. 1 Binding affinity determination by FACS
2.2 体外药效
通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选获得的纳米抗体候选分子体外药效优秀，甚至优于对照抗体。MLR实验中，使用不同donor的CD4+T细胞及DC细胞共培养，抗PD-L1的抗体可有效阻断PD-1/PD-L1抑制信号，活化T细胞，促进细胞因子的分泌。如图Fig. 2所示，经PD-L1候选抗体（A1, A2）处理后，细胞的IL-2分泌量均显著增加，表明两者具有与已上市的对照抗体药物高度相似的生物学活性。
Fig. 2 In vitro evalution of SD10 adAb candidates by MLR
2.3 体内药效验证
通过三优MIT羊驼重组单抗定制服务筛选出的纳米抗体候选分子体内药效优秀。各靶点候选分子在不同小鼠CDX模型的体内抗肿瘤药效验证案例如图Fig. 3-5所示。分为治疗组和对照组，每周给药两次，连续给药三周。结果显示各靶点候选抗体在不同剂量下均显示出和对照抗体相同，甚至优于对照抗体的抗肿瘤效果。
Fig. 3 Pseudovirus neutralization
Fig. 4 Tumor growth inhibition
Fig. 5 Tumor growth inhibition
案例二：抗IL-17A纳米抗体的开发
1. 背景
IL-17A通过与相应受体（IL-17RA/RC）结合进行信号转导，介导炎症反应的发生，在斑块状银屑病、银屑病关节炎和强直性脊柱炎等的发病过程中起关键作用。银屑病生物制剂经历了由TNF-α抗体到IL-23/12 抗体再到IL-17A/IL-23特异性抗体的迭代，IL-23 与IL-17 抗体能在较长给药间隔的同时，实现快速且持续的响应。 IL-17A开启了治疗自身免疫疾病的新时代。
1.1 临床竞争格局
目前国外已上市的IL-17抗体有3个，分别为Cosentyx（secukinumab）、Taltz（ixekizumab）和Siliq（brodalumab）。上市较早的IL-12/23 抗体乌司奴单抗2021 年销售额超90 亿美元，后续上市的IL-17A抗体响应快速，代表品种Cosentyx单抗2021年销售额超过45 亿美元，因此银屑病仍有比较大的市场需求。
1.2 单克隆抗体MOA
靶向IL-17A的抗体通过直接抑制IL-17A与其受体结合、阻断下游炎症因子功能发挥及信号传递。
2. 抗IL-17A抗体关键结果
2.1 亲和力检测结果
通过生物膜干涉技术（BLI）检测候选抗体A1和B1 与IL-17A的亲和力。实验结果如图Fig. 1 所示，候选抗体A1和B1 与IL-17A的亲和力是对照抗体的近2倍。
Fig. 1 Affinity determination by BLI
2.2 亲和活性检测结果
2.2.1 人猴交叉活性
通过 ELISA检测候选抗体A1和B1与不同种属的IL-17A结合活性的结果。实验结果如图Fig. 2A 和2B 所示，候选抗体 A1和B1同时具有人猴交叉的亲和活性，且亲和活性比对照抗体更好。
Fig. 2 Binding affinity determination by ELISA
2.2.2 阻断活性分析
通过ELISA检测候选抗体A1和B1在蛋白水平阻断IL-17A与受体IL-17RA结合的功能活性，结果如图Fig. 3 所示，候选抗体A1和B1显示出比对照抗体更好的阻断活性，候选抗体A1和B1的IC50值分别为703.2 nM和723.2 nM，是对照抗体的1.5倍。
Fig. 3 Blocking assay by ELISA
2.3 体外药效验证
IL-17A在人成纤维细胞(NHDF)上可诱导促炎细胞因子IL-6的表达。通过检测IL-6的表达量来验证人源化候选抗体A1和B1在NHDF细胞上与IL-17A的中和反应，实验结果如图Fig. 4 所示，候选抗体A1和B1 能够中和IL-17A的活性，显著抑制IL-6的表达，且中和活性与对照抗体相当。
Fig. 4 Neutralizing assay on NHDF cell
案例三：抗TNFR2纳米抗体的开发
1. 背景
肿瘤坏死因子受体2 (tumor necrosis factor receptor 2，TNFR2，TNFRSF1B) 蛋白属于肿瘤坏死因子受体超家族，表达于激活的调节性T细胞 (Regulatory T cell，Treg) 、骨髓系来源的抑制性细胞 (Myeloid-derived suppressing cells，MDSC) 、CD4和CD8阳性的效应T细胞表面，同时也高表达于多种肿瘤细胞表面，如Sézary综合症、蕈样肉芽肿等。由于TNFR2在肿瘤内Treg、MDSC以及许多肿瘤细胞表面的特异性高表达，使其有望成为癌症免疫疗法有希望的靶标，带来更好的药效和更高的安全性。
1.1 临床竞争格局
全球共有14个TNFR2相关的治疗型抗体开发，BioInvent拥有两款TNFR2抗体，其中BI-1808是全球首个进入临床开发阶段的TNFR2抑制剂，BI-1910为一款TNFR2激动剂，目前处于临床前阶段。虽然目前已有靶向TNFR2的临床在研拮抗型单克隆抗体药物 (例如BI-1808) ，但存在治疗效果不充分、毒性较大的问题。作为治疗剂，仍有继续开发靶向TNFR2靶点的小分子抗体 (例如单结构域抗体) 的迫切需要。
1.2 单克隆抗体MOA
靶向TNFR2靶点的拮抗型抗体药物通过抑制或杀伤肿瘤内Treg及MDSC等免疫抑制性细胞可激活抗肿瘤免疫反应，达到杀伤肿瘤的治疗效果。
2. 抗TNFR2抗体关键结果
2.1 亲和活性检测
通过FACS检测候选抗体与TNFR2过表达细胞株的亲和阻断能力。亲和活性实验结果如图Fig. 1 所示，候选抗体A1对huTNFR2-HEK293细胞的结合活性与对照抗体相当。
Fig. 1 Affinity testing of antibodies
2.2 体外功能检测
2.2.1 阻断活性分析
采用FACS方法检测候选抗体A1是否阻断TNFα与TNFR2的结合。结果如图Fig. 2 所示。候选抗体A1基本不阻断TNFα结合TNFR2，而对照抗体可完全阻断TNFα结合TNFR2，其IC50为0.0917 μg/mL。表明候选抗体A1与对照抗体表位可能不同。
Fig. 2 Blocking testing of antibodies
2.2.2 细胞杀伤实验
通过TNFα诱导的细胞坏死实验来评价候选抗体对TNFα-TNFR2信号通路是否有抑制活性。实验结果如图Fig. 3 所示，候选抗体A1抑制活性远远优于对照抗体，其中，A1的EC50为0.03390 μg/mL，对照抗体的EC50为0.4993 μg/mL。
Fig. 3 Cell killing assay by FACS
2.3 体内药效验证
靶向TNFR2靶点的拮抗型抗体药物通过抑制或杀伤肿瘤内Treg及MDSC等免疫抑制性细胞可激活抗肿瘤免疫反应，达到杀伤肿瘤的治疗效果。通过TNFR2人源化小鼠模型评价了候选分子A1在小鼠体内的抑瘤能力，结果如图Fig. 4 所示，高剂量和中剂量下，A1和阳性对照抗体的抑瘤效果一致，但A1组肿瘤完全消退的只数多余对照抗体组。
Fig. 4 Tumor growth inhibition
科研成果
客服咨询
咨询