-L1抗体亲和筛选：Benchmark的EC50值为0.360 nM，Candidate 2的EC50值为0.330 nM，Candidate 2与细胞的亲和能力优于Benchmark。所有候选抗体与细胞均有较好的亲和能力。

TNFR2抗体阻断筛选：Benchmark的IC50值为0.110 μg/mL。Candidate 1-3的EC50值低于Benchmark，因此其阻断效果优于Benchmark。所有候选抗体与细胞均有较好的阻断能力。

PD-L1抗体竞争筛选：Benchmark的IC50值为3.30 nM，Candidate 1-4的IC50值分别为0.478 nM、0.831 nM、0.614 nM和0.762 nM。所有候选抗体与Benchmark有较好的竞争结合细胞的能力。

FACS法检测T细胞增殖：通过分析增殖后T细胞的荧光强度来计算增殖的活性，如上图所示，CD4+增殖比例为26.72%，CD8+增殖比例为43.85%。CD3抗体介导的T细胞增殖非常明显。

FACS法分析PBMC中各类免疫细胞的亚群比例：利用流式细胞术，用不同marker的荧光抗体对人的外周血细胞进行染色，通过荧光区分不同细胞群，并统计各自的占比。人的PBMC中各类细胞的检测的占比图如上图所示，PBMC中CD3阳性比例为58.33%，CD4阳性比例为26.42%，CD8阳性比例为24.92%，CD16阳性比例为6.71%，CD56阳性比例为9.27%，CD19阳性比例为15.78%，CD14阳性比例为16.28%，CD45阳性比例为98.01%。

PD-L1荧光素酶报告基因系统：Benchmark的IC50为0.064μg/mL，能够较好的阻断PD-1/PD-L1信号通路活化。 Candidate 1的IC50值为0.069 μg/mL，显示出了与Benchmark相当的阻断活性。

CD40荧光素酶报告基因系统：Benchmark的EC50为0.256 μg/mL，能够较好的激活CD40通路活化。 Candidate 3的EC50值为0.139 μg/mL，显示出了优于Benchmark的激活活性。

VEGF荧光素酶报告基因系统：Benchmark的IC50值为0.005 μg/mL，能够较好的阻断VEGF/VEGFR2信号通路活化。Candidate 1-3的IC50值均大于Benchmark，其阻断效果差于Benchmark。

ADCC荧光素酶报告基因系统：Benchmark的EC50值为0.299 nM，其Fc能够较好的结合CD16a并激活下游的信号通路，触发NF-κB驱动的荧光素酶表达，实验窗口可达10倍以上，灵敏度可达1 nM以下。

MTS法检测HER2抗体增殖抑制活性：Benchmark 1的IC50值为0.436 nM，Benchmark 2的IC50值为0.512 nM。2个Benchmark均能够阻断HER2二聚化造成的信号通路激活，展现出了较好的抑制靶细胞增殖的药效。

FACS法检测细胞周期分布：通过PI试剂染色。含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度是G0/G1期的2倍，正在DNA复制的S期细胞的荧光强度介于中间。如上图所示，正常培养的大部分处于G0/G1期以及S期。

Caspase-Glo检测TF-1细胞凋亡通路：TL1A与放线菌酮（CHX）协同可以刺激Caspase信号通路，诱导TF-1细胞凋亡，抗体可以抑制凋亡。 Benchmark的IC50值为0.030 μg/mL，显示出较好的抑制凋亡的效果。

CTG法检测TNFα诱导的靶细胞凋亡：TNFα与TNFR2-Jurkat细胞结合时会诱导细胞凋亡。Benchmark可以阻断TNFα和TNFR2的结合，其IC50值为0.766 nM，显示出较好的阻断TNFα-TNFR2通路的效果。

MTS法检测CD20抗体的对人补体的CDC活性： Benchmark、人补体、靶细胞共孵育后，通过MTS法检测CDC活性。Rituximab的EC50值为0.058 μg/mL，有72%的杀伤活性窗口。

TS法检测CD20抗体的对猴补体的CDC活性：Benchmark、人补体、靶细胞共孵育后，通过MTS法检测CDC活性。Rituximab的EC50值为0.294 μg/mL，有80%的杀伤活性窗口。

ELISA法检测抗体抑制IL-17A诱导细胞分泌IL-6：Benchmark的IC50值为2.343 nM，Candidate 1和2的IC50值分别为2.788 nM和2.013 nM。2个Candidate和Benchmark均能够阻断IL-17A—IL-17R通路，抑制IL-6的分泌 。

CBA检测微量样本中的多细胞因子：利用一系列不同荧光强度的微球对细胞培养上清样品中的IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4、IL-2等细胞因子进行测定，与阴性对照相比，6种细胞因子分泌均增加，且IL-6分泌最显著。

ELISA法检测抗体抑制细胞STAT3磷酸化：Benchmark能够阻断某自免相关细胞因子诱导的DU145胞内STAT3磷酸化，IC50值为15.92 nM，最大抑制率可达90%，实验体系可用于筛选候选抗体。

FACS法检测抗体抑制膜蛋白CD95的表达：CD40与CD40L结合后会促进CD95的表达，加剧细胞凋亡。Benchmark可以阻断该信号通路，IC50值为0.013 μg/mL。4个Candidate与Benchmark具有相当的抑制凋亡的效果。

CD3/TSA双抗介导的CD8+T细胞杀伤靶细胞：将靶细胞、PBMC和CD3/TSA双特异性抗体进行共孵育，使用LDH检测杀伤效果。Benchmark的IC50值为0.009 nM，最大杀伤率为35%。

BTN3A抗体对γδT细胞的激活效果：如上图所示，Benchmark（ICT01）可以靶向BTN3A并激活γδT细胞，具有良好的浓度依赖性，在6 μg/mL的剂量下，最大的窗口可以达到25%。

混合淋巴细胞反应（MLR）：将CD4+T细胞和另一个供体的DC细胞共培养，由于MHC错配，DC能刺激CD4+T细胞的增殖、分泌IL-2、分泌IFN-γ。DC细胞表面表达PD-L1，可与T细胞表面的PD-1结合并抑制T细胞激活。PD-1或PD-L1抗体可以通过阻断PD-1—PD-L1通路并解除抑制，促进细胞因子分泌。如上图所示，3个Benchmark均可解除PD-1—PD-L1的抑制信号，促进IL-2和IFN-γ的分泌。在同样的剂量下，Candidate展现出比Benchmark更好的药效。

抗体依赖的细胞毒性作用（ADCC）：将靶细胞、PBMC、抗体进行共孵育，使用LDH检测ADCC效果。 Benchmark的IC50值为0.018 μg/mL，在0.2 μg/mL剂量下达到最大靶细胞杀伤，最大杀伤率为25%。

NKG2D抗体直接激活NK细胞：将抗体与NK细胞进行共孵育，Benchmark和Candidate 3能够促进NK细胞分泌IFN-γ和表达CD107a（未展示），抗体有较好的激活NK细胞的效果 。

CD47抗体促进巨噬细胞吞噬靶细胞：将CFSE标记的肿瘤细胞、巨噬细胞、CD47抗体进行共孵育，吞噬3小时后，Benchmark处理后的巨噬细胞吞噬率达到44%，Candidate 2处理后的巨噬细胞吞噬率达到46%。

抗体介导的M2型巨噬细胞转化为M1型：单核细胞经M-CSF诱导和IL-4诱导并得到M2型巨噬细胞。阳性对照LPS可以将M2型（CD206）巨噬细胞逆转至M1型（CD86），逆转率为85%，Candidate 1的逆转率为74%。

TREM1抗体激活单核细胞：使用包被Benchmark的细胞板可以产生交联效应，诱导单核细胞表面的TREM1形成聚体并激活IL-8分泌，Benchmark在25 μg/mL浓度下可以达到4.5倍的IL-8分泌增加。

CD100抗体抑制髓系细胞分化成MDSC：将髓系细胞、CD100重组蛋白、抗体共孵育，通过FACS检测MDSC（CD33+HLADRlowCD11b+）比例。Benchmark和3个Candidate都可以抑制CD100的功能，最大抑制率为20%。

MDSC抑制CD8+T细胞增殖：将诱导的MDSC（CD33+HLA-DRlowCD11b+）、CFSE标记的CD8+T细胞共孵育，通过FACS检测CD8+细胞增殖。如上图所示，体系中MDSC的比例越高，CD8+T细胞的增殖代数出现显著减少。实验结果表明MDSC对CD8+T细胞产生了明显的抑制作用。

3种荧光法检测Trop2抗体的内吞效应：单荧光法（左），Sacituzumab在Trop2-HEK293细胞上的内吞率在第3小时可达38%。双荧光法（中），Sacituzumab在Trop2-HEK293细胞上的内吞率在第0.5小时可达16% 。 pH-rodo法（右），Sacituzumab在Trop2-HEK293细胞上的内吞率在第4小时可达36% ，第24小时可达76% 。不同的荧光检测方法有各自的局限性并造成检测结果有所差异，荧光法主要评价抗体被内吞的速率。

Fab-ZAP偶联法筛选Trop2内吞抗体：将Fab-ZAP和抗体偶 子类 40 蛋白酶活性检测 子类 41 补体级联通路联，抗体引导ZAP复合物结合靶细胞、内化、杀伤细胞。Benchmark的EC50值为0.004 nM，48小时的最大杀伤率可以达到69%。

ADC杀伤法筛选Trop2内吞抗体：将抗体和MMAE毒素进行偶联并得到ADC。将偶联好的ADC、靶细胞进行共孵育，48小时用MTS检测活细胞水平。Benchmark的EC50值为0.217 nM，48小时的最大杀伤率可以达到92%。

X靶点抗体抑制HUVEC细胞迁移：上室接种HUVEC细胞并移除培养基中的血清，下室添加配体、培养基和2%FBS。Benchmark在100 μg/mL剂量下，HUVEC细胞的迁移抑制率降低为63%。

X靶点抗体抑制MDA-MB-231细胞迁移：上室接种MDA-MB-231细胞并移除培养基中的血清，下室添加配体、培养基和2%FBS，膜上铺细胞外基质。Benchmark在10 μg/mL时可以抑制乳腺癌细胞侵袭。

X靶点抗体促进嗜酸性粒细胞粘附：分离全血中的嗜酸性粒细胞并置于预包被基质的细胞板中。经剂量为50 μg/mL的Candidate 1处理后，嗜酸性粒细胞的粘附能力得到增强，窗口约1倍左右。

X靶点抗体促进嗜酸性粒细胞粘附：分离全血中的嗜酸性粒细胞并置于预包被基质的细胞板中。经剂量为50 μg/mL的Candidate 1处理后，嗜酸性粒细胞的粘附能力得到增强，窗口约1倍左右。

X靶点抗体解除其对脂蛋白脂肪酶的抑制活性：将X靶点重组蛋白、脂蛋白脂肪酶、Benchmark进行共孵育。6 μg/mL的Benchmark体系中，产物信号显著上升，表明其可以解除X靶点重组蛋白对脂蛋白脂肪酶的抑制活性。

X靶点抗体抑制补体生产MAC：将补体血清、Benchmark进行共孵育。25 μg/mL的Benchmark体系中，MAC的产物生成抑制率为78%。Candidate 1体系中，MAC的产物生成抑制率为78%。