服务简介
背景：抗体药研发和生产过程中的存在对蛋白原料的大量需求，如体内药效药代评估、制剂工艺开发及安全性评价等；另外诊断试剂的研发和生产也需要大量的蛋白原材料。
方法：三优生物推出高品质抗体快速制备服务，基于GMP生产细胞株，通过构建稳定细胞池进行抗体大样的制备，筛到的高表达稳定细胞池可用于后续大量蛋白的持续生产，全程仅需35天！
服务亮点
经验丰富，极速交付，成功率高
基于数百个服务项目经验积累，数十年丰富经验的专业团队支撑，35天极致交付速度和超95%项目成功交付保证，从而收获高达90%的客户满意度体验。
多维质控，灵活选择，确保品质
先进的抗体生产工艺体系搭载国际化的高端设备，在GMP级宿主细胞和全程C+A级洁净环境生产，配合三优系统完善质控体系保障，保证抗体交付质量。
一次构建，持续生产，高性价比
采用稳定细胞株构建的方式进行大量抗体生产，全程化学成分限定的培养基的生产，保证细胞株表达批间差处于可控范围内，后续亦可持续不断进行生产。
服务内容
客户提供：目的基因序列或含目的基因的质粒
服务流程
案例展示
1. 表达量分析
对39个项目的细胞池摇瓶期表达量进行统计，结果如Fig. 1所示，平均表达量为2.2 g/L，多个细胞池表达量高于3.0 g/L。
Fig. 1 细胞池表达量分析
2. 细胞池Fed-batch培养
将抗体A分子进行快速细胞株构建，筛选得到的7个细胞池接种到培养基中进行摇瓶Fed-batch培养，定期取样，检测活细胞密度、细胞活率、表达量以及乳酸、葡萄糖等代谢数据，检测结果如Fig. 2所示。细胞株活细胞密度最高可到2.5E+7 cells/mL，培养14天后，细胞活率仍可维持在70%以上，抗体表达量可达3.4 g/L，乳酸始终维持在相对较低水平。
Fig. 2 细胞池Fed-batch培养
3. 表达产物质控分析
3.1 SDS-PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)
抗体A分子表达产物纯化后经SDS-PAGE鉴定结果如Fig. 3a所示，样品的非还原和还原分子量与理论分子量大小一致，纯度均大于95%，符合交付标准。
Fig. 3a SDS-PAGE
3.2 SEC-HPLC（分子排阻色谱法）
抗体A分子表达产物经过纯化后，进行SEC检测，结果如Fig. 3b所示，样品无聚体，单体纯度达到100%，符合交付标准。
Fig. 3b SEC-HPLC
4. 表达产物活性分析
抗体A分子的快速细胞株表达产物活性分析结果如Fig. 4所示，其EC50值为0.012 μg/mL，表明其具有良好的生物活性。
Fig. 4 Binding determination by FACS
5. 阳离子层析纯化提高SEC纯度
对某客户项目的抗体蛋白进行一步亲和纯化，SEC检测项纯度低于90%，不符合交付标准，经过阳离子或多模式层析优化后，SEC纯度提高到98.0%以上，收率85%以上，符合交付标准。
Fig. 5a 纯化层析图谱
Fig. 5b 样品纯化前（左）和纯化后（右）SEC-HPLC图谱
6. DoE设计纯化方案提高融合蛋白纯度
对某客户项目的抗原融合蛋白进行纯化，一步ProteinA层析未得到蛋白，非还原SDS-Page项纯度较低，不符合交付标准。经过对此亲和层析所用的buffer筛选、上样条件、洗脱缓冲液和洗脱方式优化，非还原SDS-Page纯度提高到85%以上，还原SDS-Page调高至95%以上，收率提高至80%以上，符合交付标准。得到了客户的认可。
Fig. 6 纯化层析图谱（左）和SDS-Page图谱（右）
设施设备
1000+平方C+A级洁净环境
细胞株构建实验室
AKTA蛋白纯化仪
Agilent 1100 高效液相色谱仪
Applikon发酵罐
科研成果
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