服务简介
背景：工业细胞株是抗体药物商业化生产的基础，细胞株的合规性、表达量、表达产物质量、稳定性是衡量细胞株的4个关键指标。目前行业内高表达稳定工业细胞株构建普遍存在宿主细胞溯源不清晰、细胞株构建周期较长、单克隆源性无法保障、抗体表达量低等问题。
方法：三优高表达稳定工业细胞株构建平台致力于为全球客户提供生产用细胞株。根据客户的需求，进行基因优化、载体构建、细胞转染、细胞池筛选、单细胞克隆及筛选、细胞库构建、细胞库检定和稳定性评估服务。
优势: 目前引入4套工业化细胞授权，实行cGMP标准，最快仅需2.5月即可获得稳定高表达高质量细胞株，表达量可达12 g/L。
案例: 团队成员项目经验丰富，已有数十个工业细胞株的构建及鉴定经验，种类涵盖双特异性抗体、三特异性抗体、单抗、融合蛋白等。
服务亮点
高产： 表达量最高可达12 g/L
基于板式反应器、管式反应器、摇瓶、发酵罐等多重筛选体系；选用GS高表达筛选系统，提供4种商业化授权的宿主细胞供选择；采用bulk pool、mini pool两种构建模式，1000+克隆逐步淘汰选优，确保最终获得高表达稳定工业细胞株。
稳定： 超过60个PDL评估确保商业化生产
从细胞株传代稳定性、细胞生长稳定性、抗体持续生产稳定性、基因序列一致性和基因拷贝数等方面对细胞株稳定性进行超过60个PDL的评估，以确保商业化生产。
优质： 系统全面的表达产物质控、稳定性评估
11项表达产物质控指标，10项细胞株稳定性指标，检测结果综合指导克隆筛选，以获得高质量细胞株。
合规： 种子细胞符合cGMP规范，4套宿主均有商业化授权
文档记录清晰可追溯、宿主细胞溯源清晰、细胞株传代记录清晰、细胞库构建及检定记录清晰；细胞株的单克隆源性符合法规要求，影像资料完整；细胞库构建符合cGMP标准；细胞库检定满足中美申报法规要求。
快速： 获得稳定高产单克隆细胞株仅需约2.5个月
最快约2.5个月时间即可获得稳定高产的可用于治疗产品开发的工业单克隆细胞株。
服务内容
服务流程
案例展示
1. 细胞株表达量数据
1.1 某单抗项目细胞株构建阶段数据汇总
目的：考察细胞株构建过程中表达量增长趋势。
方法：汇总某单抗项目细胞池构建和单克隆细胞株构建各阶段表达量数据。
结论：同条件下进行分批补料培养，单克隆细胞株表达量较细胞池提高2.4倍，进行初步优化后，摇瓶中单克隆细胞株表达量达到了9.0 g/L
Fig. 1 细胞株构建过程各阶段数据汇总
1.2 单克隆细胞株摇瓶表达量数据
目的：考察细胞株构建平台项目表达量情况。
方法：对24个项目的TOP4单克隆细胞株14天摇瓶补料发酵的表达量进行分析。
结论：单克隆表达量基本在4-6 g/L之间，表达量最高可达10.41 g/L，平台工艺已趋于成熟。
Fig. 2 单克隆细胞株摇瓶补料培养表达量
1.3 单克隆细胞株24深孔板表达量、Qp
目的：考察单克隆细胞株24深孔板表达量、Qp。
方法：挑选25个单克隆细胞株进入24深孔板，进行12天的补料发酵，定期取样，检测细胞密度和活率，培养结束检测抗体表达量，并根据表达量和活细胞密度积分值计算Qp值。
结论：11个细胞株在24深孔板中表达量达到2.5 g/L以上，最高到3.9 g/L，Qp最高达到57 pg/cell/day。
Fig. 3 细胞株24深孔板补料发酵表达量及Qp分布
2. 某双抗项目数据
2.1 3L反应器补料发酵数据
目的：考察单克隆细胞株反应器细胞生长及表达量情况。
方法：细胞株接种到3 L生物反应器进行补料发酵，定期取样，检测相关指标。
结论：活细胞密度在第6天-第7天达到峰值，VCD峰值为(1.0-1.5)E+7 cells/mL，代谢副产物乳酸浓度始终＜2 g/L。培养16天，细胞活率仍维持70%左右，抗体表达量达到12 g/L。
Fig. 4 某双抗项目3 L反应器培养数据
2.2 某双抗项目细胞株稳定性数据汇总
目的：考察单克隆细胞株稳定性。
方法：某双抗项目进行GMP建库后，对细胞库进行稳定性考察。
结论：PDL超过60时，基因拷贝数偏差在30%以内，表达量偏差在30%以内，符合行业内要求，细胞株稳定性可支持5万升生产规模。
Fig. 5 稳定性评估（A. 表达量；B. 基因拷贝数）
2.3 质量分析数据
2.3.1 SEC-HPLC
某双抗项目细胞株构建的摇瓶筛选阶段，对表达产物进行分子排阻色谱检测，结果显示：该双抗样品主峰比例为96.57%。
Fig. 6 SEC-HPLC
2.3.2 CE-SDS
某双抗项目细胞株构建的摇瓶筛选阶段，对表达产物进行还原毛细管电泳检测，结果显示：该双抗样品主峰比例为95.4%。
Fig. 7 CE-SDS
2.3.3 CEX
某双抗项目细胞株构建的摇瓶筛选阶段，对表达产物进行电荷异质性检测，结果显示：该双抗样品主峰比例为65.56%。
Fig. 8 CEX
设施设备
(1) 近1000 m^2的C+A级GMP洁净区
(2) 近百台高精尖的仪器设备
1000+平方C+A级洁净区
细胞震荡培养箱
单细胞打印机
单克隆成像仪
Maurice蛋白质表征分析系统
高通量分子互作仪
科研成果
客服咨询
咨询